磁珠法從鼻/咽拭子轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基中提取SARS-CoV-2病毒RNA方案及試劑配方
新冠疫情全球爆發(fā)，為了幫助廣大客戶更好地利用磁珠從鼻/咽拭子中提取SARS-CoV-2病毒RNA，我們給出如下方案供大家參考優(yōu)化：
1. 取出200 uL含鼻/咽拭子的病毒轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基（VTM），并與100 uL GITC裂解緩沖液合并；
2. 加入20 uL超順磁珠（PMSi400001, PuriMag）+ 270 uL異丙醇，用移液器混合4-6次，等待1分鐘，使RNA與磁珠結(jié)合；
注意：磁珠和異丙醇可以預混以改善工作流程。
3. 將板放在磁力架上約2分鐘至溶液澄清。
4. 去除上清液；
注意：去除上清液時，將移液器吸頭放在板的底部，以便可以吸出所有液體。
5. 用150 uL異丙醇洗滌磁珠一次。
注意，清洗是指先將異丙醇添加到板上（同時放在磁力架上），靜置約30秒鐘，然后再去除異丙醇。
6. 用200 uL 70％乙醇洗滌；
7. 重復步驟6；
8. 放在磁力架上干燥5分鐘（但不要放置太久，因為完全干燥/片狀的珠子很難重懸）；
9. 重懸于20 uL 超純水中，放置1分鐘；
10. 再次放在磁力架上至溶液澄清；
11. 將5 uL上清（含模板RNA）轉(zhuǎn)移到新板中進行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR。
GITC 裂解緩：
GITC 6 M，
Tris HCl pH 7.6-8.0 50 mM，
Sarkosyl 2%，
EDTA 20 mM，
Antifoam 0.1%
病毒轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基（VTM）：
Gibco Hanks 860 mL
10% BSA 100 mL (final conc. 1%)
Amphotericin B 10 mL
Penicillin 10 mL
pH 7.2-7.4
Gibco Hanks Solution：
10×Gibco Hanks balanced Salt Solution 200 mL
MilliQ H2O 770 mL
0.4% phenol red 5 mL
磁珠
本公司提供RNA提取磁珠 PMSi400001, PuriMag
REFERENCES
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