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      細(xì)胞因子是免疫反應(yīng)中分泌的一類蛋白質(zhì)，機(jī)體的免疫反應(yīng)通常是由多個(gè)細(xì)胞因子控制的。許多生物公司都在開(kāi)發(fā)各種用于同時(shí)檢測(cè)幾十種細(xì)胞因子的試劑盒，目前最受歡迎的試劑盒采用了免疫磁珠技術(shù)使實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、細(xì)胞因子識(shí)別范圍大。文中羅列了幾種市面上常見(jiàn)的免疫磁珠檢測(cè)的產(chǎn)品及其性能比較。

　　細(xì)胞因子是機(jī)體免疫反應(yīng)中不同細(xì)胞分泌的一類小蛋白質(zhì)。例如，當(dāng)白細(xì)胞介素4(IL-4)單獨(dú)發(fā)揮作用時(shí)，它使得B細(xì)胞增殖，并生產(chǎn)出特定類型的抗體。但干擾素-γ(IFN-γ)同時(shí)存在時(shí)，會(huì)減少B細(xì)胞的數(shù)目并改變它們產(chǎn)生抗體的類型。麥吉爾大學(xué)蒙特利爾神經(jīng)學(xué)研究所的實(shí)驗(yàn)治療計(jì)劃主任Amit Bar-Or指出，這表明免疫反應(yīng)并不是單一的細(xì)胞因子指導(dǎo)的。

　　在過(guò)去的10年中，許多大的生物公司生產(chǎn)出來(lái)各種用于同時(shí)檢測(cè)幾十種細(xì)胞因子的試劑盒。許多試劑盒利用一對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)，其中一個(gè)用來(lái)捕獲細(xì)胞因子，另一個(gè)用來(lái)檢測(cè)所捕獲的細(xì)胞因子。一些試劑盒將捕獲的抗體附加到一個(gè)平坦的表面，例如傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附。但現(xiàn)在比較流行的試劑盒的做法是，研究人員將他們的樣品添加到包含不同類型的混合免疫磁珠的培養(yǎng)板中。每一種類型的磁珠表面都包被著所測(cè)量細(xì)胞因子對(duì)應(yīng)的抗體類型，并且與不同的熒光染料相結(jié)合，以便在混合物中區(qū)分不同的磁珠。樣品加入后，成功捕獲抗體的磁珠的熒光分子標(biāo)記能夠?qū)⑺鼈兣c空磁珠區(qū)分開(kāi)來(lái)?；诖胖榈臋z測(cè)方法一般使用由Luminex公司開(kāi)發(fā)的Luminex免疫磁珠，這種微珠需要特殊的儀器進(jìn)行檢測(cè);或者使用與微珠兼容的傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Luminex的相應(yīng)儀器設(shè)備可以區(qū)分100到500種不同比率熒光染料的免疫磁珠，磁珠一般含有兩種或三種染料，因而不同的染料比率能夠形成多達(dá)100到500種熒光而被識(shí)別，而傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀只能測(cè)量30種染料組合。

　　研究人員往往會(huì)基于特定的細(xì)胞因子選擇多路復(fù)用試劑盒，盡管許多公司出售的試劑盒提供的面板很大。有些公司可以提供小面板試劑盒的定制工作，幫助研究人員縮小他們想了解的免疫反應(yīng)、疾病或治療相關(guān)的細(xì)胞因子范圍。無(wú)論廣告上介紹得有多好，驗(yàn)證試劑盒功效的最好方式就是逐個(gè)使用不同的試劑盒來(lái)檢測(cè)同一個(gè)樣品。Bar-Or建議在實(shí)驗(yàn)前可以與試劑公司溝通獲得試用折扣。

　　接下來(lái)就介紹市面上最受歡迎的幾種基于Luminex免疫磁珠檢測(cè)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)系統(tǒng)。

　　BIO-RAD

　　Bio-Plex Pro系統(tǒng)

　　根據(jù)2012年對(duì)北美和歐洲學(xué)術(shù)界研究人員和生物技術(shù)/制藥公司的調(diào)查，Bio-Rad公司是目前北美市場(chǎng)最大的抗體檢測(cè)試劑盒賣家，他們生產(chǎn)的試劑盒采用Luminex公司的免疫磁珠。Life Technologies公司和EMD Millipore公司分別位居第二和第三。

　　研究人員可以利用Bio-Rad公司的系統(tǒng)來(lái)測(cè)量64種不同的人類細(xì)胞因子，同時(shí)公司也提供可以一次性捕捉21到27種細(xì)胞因子的試劑盒。使用該公司的在線工具，研究人員還可以設(shè)計(jì)細(xì)胞因子檢測(cè)磁珠、定制一個(gè)較小的磁珠子集或購(gòu)買特定類型的磁珠。Bio-Rad公司檢測(cè)也適用于檢測(cè)小鼠和大鼠的細(xì)胞因子，也可用于為犬和靈長(zhǎng)類動(dòng)物做特定的疾病檢測(cè)。

　　優(yōu)勢(shì)：該公司提供不包含重復(fù)探針的21- and 27-plex試劑盒，因此研究人員可以通過(guò)兩組平行試驗(yàn)捕捉到48種細(xì)胞因子，從而擴(kuò)大探索免疫反應(yīng)的范圍。

　　挑戰(zhàn)：與大多數(shù)多路復(fù)用分析一樣，Bio-Plex系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞因子的能力取決于研究人員所用的樣本類型。Bio-Rad的17-plex試劑盒擅長(zhǎng)探測(cè)樣本中的IFN-γ，而在Bar-Or的一個(gè)研究中，他們發(fā)現(xiàn)Bio-Rad的10-plex試劑盒對(duì)于低濃度血清樣品中的IFN-γ敏感度很差。

　　價(jià)格：試劑盒價(jià)格從850美元(3-plex)到的3500美元(27-plex)不等。Single-plex子集每個(gè)售價(jià)200美元。

　　EMD MILLIPORE

　　Milliplex

　　Millipore的系統(tǒng)能捕獲最廣泛的細(xì)胞因子：108種人類細(xì)胞因子以及小鼠、大鼠、猴、狗、豬的細(xì)胞因子。Millipore公司最大的試劑盒可以同時(shí)檢測(cè)41種人體細(xì)胞因子，其中大部分與Bio-Rad公司的48種重疊。41個(gè)細(xì)胞因子通?？梢栽谕粯悠分斜粰z測(cè)到，雖然一些細(xì)胞因子在血清和血漿中濃度很高，需要稀釋和獨(dú)立的測(cè)量。

　　優(yōu)勢(shì)：除了廣泛的細(xì)胞因子檢測(cè)能力，Millipore試劑盒只需要25微升樣品量，這是其它試劑盒所需樣品的一半。對(duì)于西雅圖華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)副教授Stephen De Rosa來(lái)說(shuō)，Milliplex比Bio-Rad、 Life Technologies和 BD Biosciences生產(chǎn)的試劑盒的樣本重復(fù)測(cè)量的一致性更高。盡管如此，研究人員還是應(yīng)該找到針對(duì)自己樣品最合適的試劑盒。

　　挑戰(zhàn)：公司在試劑盒中應(yīng)當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞因子蛋白制劑，如若不然，不同批次的試劑盒得到的結(jié)果很難進(jìn)行比較。公司正在試圖解決這一問(wèn)題，例如每一批次的試劑盒都提供相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。

　　成本：試劑盒價(jià)格范圍從500美元(single-plex)到1100美元(5-plex)不等，41-plex試劑盒售價(jià)在5300美元。

　　LIFE TECHNOLOGIES

　　Novex Multiplex Assays

　　Life Technologies生產(chǎn)的測(cè)定人類細(xì)胞因子最大的試劑盒型號(hào)是30-plex和25-plex。幾乎所測(cè)定的所有細(xì)胞因子都與Bio-Rad和Millipore試劑盒重疊。試劑盒可用于小鼠、大鼠、豬、猴的細(xì)胞因子。

　　Bio-Rad公司和Millipore公司已逐漸轉(zhuǎn)向使用2007年首次推出的Luminex磁珠，Life Technologies除了磁珠試劑盒外，仍然繼續(xù)為喜歡他們和有需要的研究人員提供非磁珠試劑盒。使用磁珠檢測(cè)，可以使抗體與結(jié)合因子之間的洗滌更加簡(jiǎn)單，因?yàn)榇胖榭杀淮盆F吸引，研究人員可以簡(jiǎn)單地反轉(zhuǎn)親和板傾倒液體。而非磁性珠，研究人員必須使用特殊的方法進(jìn)行分離，非常復(fù)雜。

　　優(yōu)勢(shì)：茲堡大學(xué)的癌癥研究所免疫學(xué)監(jiān)測(cè)和細(xì)胞產(chǎn)物實(shí)驗(yàn)室的Lisa Butterfield說(shuō)她選擇Life Technologies試劑盒的原因是這家公司是唯一會(huì)向她提供定制面板的微珠有輕微的交叉反應(yīng)說(shuō)明的Luminex磁珠供應(yīng)商，這對(duì)她的研究非常重要。

　　挑戰(zhàn)：一些研究人員可能回避使用Novex試劑盒，因?yàn)榧?xì)胞因子的面板相對(duì)較小。

　　價(jià)格：無(wú)論磁珠還是非磁珠，試劑盒價(jià)格范圍從585美元(2-plex)到3,400美元(30-plex)不等。

　　BD BIOSCIENCES

　　Cytometric Bead Array (CBA)

　　雖然生產(chǎn)的試劑盒沒(méi)有Luminex公司那么受歡迎，BD Biosciences公司仍然占有最大的市場(chǎng)份額。

　　目前BD銷售6種試劑盒，可以檢測(cè)7種人類細(xì)胞因子，同時(shí)他們也提供小鼠和靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞因子的試劑盒。雖然提供的操作板小于Luminex公司，但他們的這種設(shè)計(jì)的目的是研究特定的生物過(guò)程，如過(guò)敏性反應(yīng)或感染的炎癥反應(yīng)。除此之外，如果客戶購(gòu)買了測(cè)量單一細(xì)胞因子種類的免疫微珠子集，也可以將它們通過(guò)不同的組合混合在一起，同時(shí)檢測(cè)多達(dá)30種細(xì)胞因子。

　　優(yōu)勢(shì)：伊坎醫(yī)學(xué)院兒科助理教授 Madhan Masilamani選擇了BD的CBA試劑盒，因?yàn)樗膶?shí)驗(yàn)室里已經(jīng)有流式細(xì)胞儀，使用別的產(chǎn)品必須花時(shí)間到別的地方使用儀器。

　　挑戰(zhàn)： BD正在銷售下一代流式細(xì)胞儀Accuri C6，能夠簡(jiǎn)化使用流程。CBA試劑盒使用非磁珠，即使CBA減少了洗滌和加入試劑的步驟，但是檢測(cè)步驟依然比較繁瑣。

　　價(jià)格：根據(jù)操作面板的不同，試劑盒售價(jià)在1200美元到1500美元不等。Individual Flex Sets售價(jià)為250美元，購(gòu)買相應(yīng)的緩沖液需要附加225美元。CBA數(shù)據(jù)分析的流式細(xì)胞儀軟件售價(jià)為1500美元左右。

       隨著國(guó)內(nèi)在磁珠研發(fā)技術(shù)上的不斷進(jìn)步，國(guó)內(nèi)外產(chǎn)品的差距越來(lái)越小。相對(duì)而言，國(guó)內(nèi)產(chǎn)品性價(jià)比更高，亦是不錯(cuò)的選擇。其中普瑞邁格的生物磁珠（PuriMag bead）在國(guó)內(nèi)產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)中脫穎而出，性能較為出色和穩(wěn)定，已經(jīng)被多家試劑盒廠商選作穩(wěn)定的合作伙伴。