ELISA包被抗體實驗中常用試劑的配制
2019-6-11 21:46:23點擊：
1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2 PBS
- 試 劑 質量/容量
- NaH2PO4·2H2O 0.39克
- Na2HPO4 1.27克
- NaCl 0.85克
- NaN3 200mg
- H2O（蒸餾水） 至 1000ml
2、ELISA洗液及HRP標記抗體稀釋液pH7.4，PBST
- 試 劑 質量/容量
- NaCl 2.0克
- KH2PO4 0.2克
- Na2HPO4·12H2O 2.9克
- KCl 0.2克
- NaN3 0.2克
- H2O 至 1000ml
- 吐溫（Tween）20 0.5ml
- 注：4°C保存?zhèn)溆?
3、包被液（簡稱CB）pH9.6
- 試 劑 質量/容量
- Na2CO3 1.59克
- NaHCO3 2.93克
- NaN3 0.2克
- H2O 至 1000ml
- 注：密封蓋好，4°C存放備用
4、ELISA底物液（可溶性底物）
- 試 劑 質量/容量
- 磷酸-檸檬酸緩沖液 pH5.0
- 0.1mol/L 檸檬酸（21.014克/100ml) 24.3ml
- 0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/1000ml) 25.7ml
- H2O 50ml
- 注：4°C存放備用
5、DAB底物液（不溶性底物，組化病理等）
- 試 劑 質量/容量
- 0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL
- Tris 6.05克
- HCl(36%) 3.15克（約2.7ml濃HCL）
- H2O 至 1000ml
- 注：DAB為3′，3′二氧基聯(lián)苯胺，不溶性底物，呈棕紅色
6、DAB溶液配制：（組化及Western blot 顯色）
稱DAB 30mg，用0.05mol/L pH7.6 Trs-HCl緩沖液100ml溶解，如有沉淀，過濾后使用，一般新鮮配制使用；
使用前加入1% H2O2 1ml至1.5ml，H2O2濃度為0.01%，混均后使用。
7、3′，3′，5′，5′，-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）溶液配制
用二甲基甲酰胺（dimethylformamide，DMF）或無水乙醇，將TMB配成1%濃度，4°C保存半年以內使用；
使用前，用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mg/TMB）1% TMB溶液中，再按每毫升TMB加入30% H2O2 1ul，混勻后立即使用。2N H2SO4終止后，450nm測定OD值。
8、1%離子瓊脂膠配制液
作免疫雙相擴散，單相擴散及免疫電泳中使用。
0.05U pH8.6 巴比妥鈉-HCL緩沖液。
- 試 劑 質量/容量
- 巴比妥鈉 23.8克
- 1mol/L HCl 34.5ml
- H2O 2150ml
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