PBS磷酸鹽緩沖液的配制指南
Materials and Reagents
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試劑 |
分子式 |
分子量 |
品牌 |
貨號 |
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十二水合磷酸氫二鈉 |
Na2HPO4.12H2O |
358.14 |
滬試 |
10020318 |
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磷酸二氫鉀 |
KH2PO4 |
136.09 |
滬試 |
10017618 |
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氯化鈉 |
NaCl |
58.44 |
滬試 |
10019318 |
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氯化鉀 |
KCl |
74.55 |
滬試 |
10016318 |
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miniQ水 |
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錫箔紙 |
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Equipment
1. 量筒、燒杯、耐高溫高壓藍(lán)蓋玻璃瓶（Thermo fisher)；
2. Rapid-Flower Filter（濾器）（Thermo Nalgene）。
Procedure
以配制1L 10×PBS儲存液為例：
1、 用雙蒸水清洗量筒、燒杯、10×PBS儲存液玻璃瓶（3次）。
2、 使用一次性稱量船，分別用分析天平稱取Na2HPO4.12H2O，35.814g；KH2PO4，2.4496g；NaCl，80.0669g；KCl，2.0129g。
3、 將藥品粉末倒入PBS配制專用燒杯中，加入800-900ml miniQ水，使用磁力攪拌器充分溶解（無任何固體）。
4、 用移液槍吸取2-3ul溶液滴在pH試紙上測試酸度，pH應(yīng)為6.8。
5、 將溶液轉(zhuǎn)移到PBS專用量筒或容量瓶中定容到1L（加miniQ水至1L），倒回?zé)谐浞只旌稀?/span>
6、 將濾器與微型臺式真空泵相連，打開微型臺式真空泵后，將PBS分批倒入濾器進(jìn)行過濾。濾器價(jià)格昂貴，建議一次過濾4-5L溶液。
7、 濾好的10XPBS可立刻稀釋使用；稀釋后可用pH試紙?jiān)俅未_認(rèn)pH值。
8、 暫時(shí)不用的10XPBS分裝至10×PBS儲存液玻璃瓶中（液面不超過瓶身的3/4高度），高壓滅菌。
注意事項(xiàng)：瓶蓋不能完全擰緊（保留約半圈），用錫箔紙包裹瓶蓋；不能放到底層籃子，容易被臟水污染；降溫后一旦打開滅菌鍋，必須立刻擰緊蓋子，防止外界細(xì)菌進(jìn)入。
9、 滅菌后的10XPBS可保存在室溫或4℃冰箱中。每次分裝后需蓋緊瓶蓋，降低污染概率。
10、取用前注意觀察瓶底有無沉淀，搖晃后有無懸浮物；若有說明有微生物滋生，請勿使用，需重新配置。
11、每配500ml1XPBS可用50ml進(jìn)口管測量50ml 10XPBS，加入450ml miniQ水，顛倒混勻。
Recipes
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試劑 |
分子質(zhì)量 |
10×儲存液濃度(mol/L ) |
配制1L |
配制2L 所需質(zhì)量（g） |
配制4L 所需質(zhì)量（g） |
配制5L 所需質(zhì)量（g） |
1X工作液濃度(mol/L ) |
配制1L |
|
Na2HPO4.12H2O |
358.14. |
0.1000 |
35.814 |
71.628 |
143.256 |
179.07 |
0.0100 |
3.5814 |
|
KH2PO4 |
136.085 |
0.0180 |
2.4496 |
4.8992 |
9.7984 |
12.248 |
0.0018 |
0.24496 |
|
NaCl |
58.443 |
1.3700 |
80.0669 |
160.1338 |
320.2676 |
400.3345 |
0.1370 |
8.00669 |
|
KCl |
74.552 |
0.0270 |
2.0129 |
4.0258 |
8.0516 |
10.0645 |
0.0027 |
0.20129 |
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pH=7.4 |
10×PBS儲液的pH是6.8，稀釋為1×PBS時(shí)，pH變?yōu)?.4。 |
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