客戶采用MagTransPoly進(jìn)行磁轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)——論文通訊
重慶醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)研究中心基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室發(fā)表磁轉(zhuǎn)染相關(guān)論文如下：
陳全，劉佳霖，賀靜榮，范曉霞，吳蕊鑫. 磁性納米粒介導(dǎo)沉默PI3Kγ基因調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抗小鼠肺癌細(xì)胞效應(yīng)的研究, 中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào), 2020年02期
摘要：為了探討超順磁性Fe3O4納米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）介導(dǎo)的磷脂酰肌醇3激酶γ（phosphatidylinositol 3 kinase γ,PI3Kγ）抑制表達(dá)調(diào)控的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophages,TAM）對小鼠Lewis肺癌細(xì)胞（Lewis lung carcinoma,LLC）增殖和凋亡的影響,該研究構(gòu)建了能啟動巨噬細(xì)胞（macrophage,MФ）特異性表達(dá)PI3Kγ催化亞基p100 siRNA的pSilencer-EGFP-SP-p110質(zhì)粒,通過SPIONs負(fù)載成磁性納米質(zhì)粒復(fù)合物（SPIONs-DNA）,在強(qiáng)磁作用下轉(zhuǎn)染MФ,通過普魯士藍(lán)染色法檢測SPIONs-DNA在細(xì)胞內(nèi)的分布,Real-time PCR和Western blot檢測細(xì)胞PI3Kγ p110亞基的表達(dá)水平。建立M1、M2型MФ模型,將SPIONs-DNA在強(qiáng)磁作用下轉(zhuǎn)染M2型MФ,通過Real-time PCR和Western blot鑒定細(xì)胞表型,明確M2型MФ轉(zhuǎn)化為M1型的強(qiáng)度。采用Transwell系統(tǒng)建立SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染的M2型MФ與小鼠LLC細(xì)胞的共培養(yǎng)模型,通過錐蟲藍(lán)染色法檢測LLC細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)并繪制細(xì)胞生長曲線,CCK-8法檢測LLC細(xì)胞增殖情況,硝酸還原酶法檢測共培養(yǎng)液上清中NO含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測LLC細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示,制備的SPIONs-DNA在強(qiáng)磁作用下成功轉(zhuǎn)染MФ并大量分布在細(xì)胞胞核周圍,SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞PI3Kγ p110 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于空白細(xì)胞對照組（P<0.05）。建立的M1型MФ高表達(dá)iNOS（P<0.001）,M2型MФ高表達(dá)ARG-1（P<0.001）。M2型MФ轉(zhuǎn)染SPIONs-DNA后細(xì)胞iNOS mRNA和蛋白的表達(dá)顯著增加（P<0.001）,ARG-1 mRNA和蛋白的表達(dá)顯著降低（P<0.01）。在共培養(yǎng)組中,SPIONs-DNA轉(zhuǎn)染的M2型MФ組能大量分泌NO,LLC細(xì)胞生長和增殖能力顯著降低（P<0.05）,凋亡率顯著增高（P<0.01）。結(jié)果表明,磁性納米粒負(fù)載pSilencer-EGFP-SP-p110重組質(zhì)粒能夠特異性靶向抑制巨噬細(xì)胞PI3Kγ p110的表達(dá),誘導(dǎo)M2型MФ轉(zhuǎn)化為M1型;其轉(zhuǎn)染的M2型MФ可顯著抑制LLC細(xì)胞的生長和增值,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,這與其大量分泌NO有關(guān)。該磁性納米質(zhì)粒復(fù)合物可誘導(dǎo)TAM發(fā)揮抗腫瘤作用,為研究開發(fā)有效的抗肺癌基因治療措施奠定基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞; PI3Kγ; 超順磁性Fe3O4納米粒子; Lewis肺癌; 增殖; 凋亡;
分類號：R735.2
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