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一、概述
Magarose-DEAE是一種弱陰離子交換磁珠,具有快速的磁響應(yīng)性、豐富的離子交換能力和極高蛋白結(jié)合能力。離子交換配基為二乙氨乙基(diethylaminoethyl,DEAE),該配基在pH 3-12的工作范圍內(nèi)仍然能夠保持穩(wěn)定的高蛋白結(jié)合能力。Magarose-DEAE磁珠無需對(duì)粗蛋白樣品進(jìn)行預(yù)處理(如:反復(fù)繁瑣的離心,費(fèi)時(shí)費(fèi)力的過濾操作),此外,無需控制流速及柱壓,不需要昂貴的層析設(shè)備。對(duì)熟練的操作者,在短時(shí)間內(nèi)就能完成高純度目的蛋白的提取,且能輕松實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的平行處理,實(shí)現(xiàn)高通量的蛋白純化。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-DEAE
貨號(hào)
PMAG006
磁珠濃度
25%(v/v)in 20% 乙醇
總離子能力
110~170 μmol /ml磁珠
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
~110 mg BSA /ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
三、使用方法
1. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
w 磁響應(yīng)速度快,減少操作時(shí)間;
w 磁珠具良好分散性和重懸性,提高操作的便捷性;
w 配基具有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性,提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及可重復(fù)性;
2. 操作流程(以純化含BSA蛋白樣品為例)
1) 磁珠預(yù)處理(平衡):將磁珠漩渦振蕩30 s,充分重懸;取一定量的25 %(v/v)磁珠懸液置于50 mL離心管中。磁分離,棄上清液,加入20 mL 平衡緩沖液洗滌磁珠3次,每次垂直混合2 min。
注:為獲得目標(biāo)蛋白的最大回收率,實(shí)驗(yàn)者需加入過量磁珠,一般大于蛋白結(jié)合量的20%即可。對(duì)于含較低豐度目標(biāo)蛋白的樣品中,磁珠對(duì)目標(biāo)蛋白的回收率會(huì)有所降低,因此要繼續(xù)增大磁珠的用量;
2) 蛋白吸附:將預(yù)處理的磁珠加入含BSA蛋白的樣品溶液中,漩渦振蕩30 s,置于垂直混合儀混勻30~60 min,使樣品和磁珠充分接觸并吸附,然后進(jìn)行磁分離,移棄上清液。
注:為更有效的吸附結(jié)合物質(zhì),平衡緩沖液最好含較低離子強(qiáng)度,選擇pH值應(yīng)至少與目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)相差一個(gè)pH單位,選定鹽緩沖液pH波動(dòng)在0.5 pH以內(nèi)。目標(biāo)蛋白與磁珠吸附時(shí)間與蛋白本身屬性有關(guān)。
3) 磁珠洗滌:加入20 mL的平衡緩沖液,漩渦振蕩重懸磁珠30 s后磁分離,移棄上清;該操作重復(fù)3次。
4) 蛋白洗脫:在上述完成磁珠洗滌的離心管中加入適量洗脫液進(jìn)行蛋白洗脫。迅速重懸磁珠,然后將離心管置于垂直混合儀混勻10~15 min后磁性分離,收集上清液至新的離心管中。洗脫方式主要有高鹽濃度洗脫(含1-2 M的NaCl的平衡緩沖液)和低pH洗脫(選擇低于目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)的pH范圍即可)兩種。
5) 磁珠再生:一般用2 M NaCl溶液洗滌3~5次,然后用平衡緩沖液進(jìn)行再平衡。磁珠多次使用后有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上,為保證磁珠使用效率,建議在位清洗(CIP)。
6) 在位清洗(CIP):依次采用 1.0 M NaOH、70%乙醇或30%異丙醇、純水洗滌磁珠2次;最后加入20%乙醇重懸磁珠,置于2~8℃保存。
3. 注意事項(xiàng)
1) 本產(chǎn)品不宜冷凍、干燥或離心操作。冷凍、干燥和離心等操作會(huì)引起磁珠團(tuán)聚,不易于重懸和分散,并且影響磁珠表面功能基團(tuán)的化學(xué)活性。
2) 使用本產(chǎn)品前,務(wù)必使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。
3) 使用過程中可根據(jù)需求,用純化水或緩沖液磁吸洗滌磁珠 2~3次,以去除保存液中乙醇。
4) 本產(chǎn)品需與磁性分離設(shè)備配套使用。
5) 鹽濃度與pH值均會(huì)影響特異性蛋白的結(jié)合與洗脫,客戶需自行摸索不同蛋白的結(jié)合和洗脫條件,以保證蛋白純化量和純度。
本產(chǎn)品僅供研究使用!
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