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一、概述
羧基磁珠（PuriMag G-COOH）是采用親水的高分子材料GMA與超順磁性材料復(fù)合形成的一種新型功能化磁性納米顆粒，提供永久結(jié)合和固定各種胺基配體。與傳統(tǒng)磁珠相比，PuriMag G-COOH磁珠具有超順磁性、更快的磁響應(yīng)性同時(shí)保持微球良好的分散性、極低的非特異性吸附和更高的表面羧基密度等特性，能便捷高效地與多種生物配體（蛋白、多肽、寡聚核苷酸、藥物分子等）進(jìn)行高載量共價(jià)偶聯(lián)，具有非常高的目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合能力，是醫(yī)學(xué)與分子生物學(xué)研究中重要的載體工具。用EDC活化磁珠表面的羧基，使配體通過伯胺基與羧基磁珠偶聯(lián)，可形成穩(wěn)定的酰胺鍵。 PuriMag G-COOH磁性納米顆粒，適用于各種磁性分離應(yīng)用，包括親和力富集、蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀和細(xì)胞分選。本產(chǎn)品可完全替代市場主流羧基磁珠如GE Sera-Mag? Magnetic Beads Carboxyl、Dynabeads? MyOne? Carboxyl、JSR的Carboxyl MS150、FG beads等產(chǎn)品，表現(xiàn)為等同甚至更優(yōu)的效果。
二、產(chǎn)品特性
1. 短鏈羧基磁珠PuriMag GS-COOH
基團(tuán)密度> 600 umoles carboxylic acid/g beads
2. 長鏈羧基磁珠PuriMag GL-COOH
羧基密度> 300 μmoles carboxylic acid/g beads
形態(tài)：超順磁球形
直徑：200nm
儲存：10 mg/mL ，去離子水中 2~8 °C保存，勿凍結(jié)。
常溫運(yùn)輸，正確使用保存期一年。
三、緩沖液
Coupling Buffer（偶聯(lián)緩沖液）:
50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;
Coupling Agent（偶聯(lián)試劑）:
EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
Quench Buffer（淬滅緩沖液）:
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer（儲存緩沖液）:
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
四、PuriMag G-COOH的使用
以下方案為配體與100μL的PuriMag G-COOH羧基磁珠的偶聯(lián)方案。該方案可按需放大或縮小。強(qiáng)烈建議對珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶聯(lián)條件（配體濃度、偶聯(lián)緩沖液、pH、反應(yīng)體積和溫育時(shí)間）進(jìn)行優(yōu)化。
注意：
■ 通過渦旋確保羧基磁珠均勻懸浮。
■ 為獲得最佳性能，在無胺偶聯(lián)緩沖液中偶聯(lián)，蛋白應(yīng)為0.5?4mg / mL，寡核苷酸為20?100μM，不含其它蛋白。較高濃度的蛋白可靈活地優(yōu)化反應(yīng)體積。含tris、甘氨酸、醋酸鹽或檸檬酸鹽的緩沖液不能使用。
■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES緩沖液（pH 6.0）可用作活化和偶聯(lián)緩沖液。當(dāng)使用化學(xué)合成的寡核苷酸時(shí)，寡核苷酸末端應(yīng)有5'-胺基以偶聯(lián)羧基磁珠。
■ 珠子含有0.5％SDS以穩(wěn)定懸浮液。盡管非必須，但在所有緩沖液中包含0.01?0.05％Triton X-100或0.01?0.05％吐溫20將防止羧基磁珠凝結(jié)并改善分散特性。
偶聯(lián)方案A：使用EDC的兩步偶聯(lián)
該方案被推薦用于將蛋白偶聯(lián)到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亞胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反應(yīng)性中間體。除去EDC后，加入蛋白質(zhì)配體并通過蛋白質(zhì)上的伯胺與磁珠的活化羧基偶聯(lián)。
1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分離并吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液，渦旋20秒洗滌磁珠，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再次清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。
6. 向磁珠中加入80μL偶聯(lián)緩沖液和20μL新配的EDC溶液，混勻。室溫孵育15分鐘，磁分離并吸棄上清。
7. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠，渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。
注意：該步驟應(yīng)該快速進(jìn)行，因?yàn)榇胖樯系陌贩磻?yīng)性中間體不穩(wěn)定。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白質(zhì)或配體，渦旋混勻。
9. 室溫下孵育30分鐘。根據(jù)配體和濃度的不同，最佳孵育時(shí)間可能為0.5?4小時(shí)。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含有未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
13. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
14. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯(lián)好的磁珠。
偶聯(lián)方案B：用sulfo-NHS替代兩步偶聯(lián)
該方案與上述方案類似，但使用NHS。可通過加入穩(wěn)定胺反應(yīng)性中間體的sulfo-NHS來增加EDC介導(dǎo)的反應(yīng)的效率。
2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分離并吸棄上清。
3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。
4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。
5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶聯(lián)緩沖液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。
6. 向磁珠中加入60μL偶聯(lián)緩沖液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。渦旋混勻。
7. 室溫下混勻孵育15分鐘。磁分離并吸棄上清。
8. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠。渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。
9. 加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白或配體。渦旋混勻。在室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時(shí)。
10. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清液含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可保存用于分析。
偶聯(lián)方案C：一步偶聯(lián)
這是一個(gè)快速結(jié)合方案，在一個(gè)反應(yīng)中同時(shí)加入羧基磁珠、EDC和配體。該方案最適合偶聯(lián)寡核苷酸和小分子，當(dāng)配體上的羧酸基團(tuán)的激活不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)。
1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸進(jìn)行偶聯(lián)。放在冰上。
5. 從磁力架上取下EP管。在80μL偶聯(lián)緩沖液中加入50?400μg配體。
6. 在室溫下孵育30分鐘。
7. 使用前用偶聯(lián)緩沖液配制EDC（50 mg / mL）。
8. 將20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。渦旋混勻，室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時(shí)。
9. 將試管放入磁力架中，磁分離并吸棄上清。該上清含未結(jié)合的配體，如果優(yōu)化方案可以保存用于分析。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。
11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。
13. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯(lián)好的磁珠。
更多其它羧基磁珠請參考：
羧基瓊脂糖磁珠 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/6397142410.html
羧基二氧化硅磁珠 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/3076912849.html
部分采用本磁珠文獻(xiàn)：
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2. 龔如月, 于淑媛, 王書博, 姜艷平, 崔文, 喬薪瑗, 王麗, 周晗, 徐義剛, 李一經(jīng), 唐麗杰. 基于重組 IBDV VP3 蛋白的免疫磁珠間接 ELISA抗體檢測方法的建立及初步應(yīng)用, 中國獸醫(yī)科學(xué), 2019, 49 （ 06) ： 678-686 （羧基磁珠PuriMag G-COOH偶聯(lián)抗原檢測IBDV抗體）
3. Zhiyu Zhang, Xinyu Cheng, Jia-Bin Li, Guoqiang Xu,Quantitative proteomic analysis of glycosylated proteins enriched from urine samples with magnetic ConA nanoparticles identifies potential biomarkers for small cell lung cancer, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，Volume 206, 30 November 2021, 114352（羧基磁珠PuriMag G-COOH偶聯(lián)凝集素純化糖肽）
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19. Yifeng Ding, Qiyue Yang, Xi Liu, Yulin Wang, Jia Wang, Xiaohong Wang, An ultrasensitive fluorescence nano-biosensor based on RBP 41-quantum dot microspheres for rapid detection of Salmonella in the food matrices, Food Chemistry, Volume 468, 2025, 142504, https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2024.142504. (PuriMag G-COOH羧基磁珠偶聯(lián)蛋白)
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