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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)的專門技術(shù),是研究基因表達(dá)調(diào)控、突變分析、基因沉默、蛋白質(zhì)等的工具,目前已成為生物和醫(yī)學(xué)等研究實(shí)驗(yàn)室廣泛使用的基本技術(shù)。磁轉(zhuǎn)染(Magnetofectio)是一種新穎、簡單、高效的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞的方法。它利用多聚陽離子進(jìn)行表面修飾的磁性粒子作為載體攜載基因,它們帶有陽性電荷易于和有陰性電荷的DNA結(jié)合,并通過磁力將載體吸引到靶細(xì)胞,進(jìn)而被靶細(xì)胞吸收。磁轉(zhuǎn)染可使攜載的基因在幾分鐘內(nèi)富集在細(xì)胞表面,使得100%的細(xì)胞與顯著的載體劑量接觸。因而具有如下優(yōu)勢:
l 與標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染相比,轉(zhuǎn)染細(xì)胞百分比大大提高了轉(zhuǎn)染率。
l 與短期孵育后的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染相比,轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平提高了數(shù)千倍。
l 極低的載體劑量可實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染率和高轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平,從而節(jié)省昂貴的轉(zhuǎn)染試劑。
l 極短處理時(shí)間。與標(biāo)準(zhǔn)程序數(shù)小時(shí)比,用基因載體孵育細(xì)胞幾分鐘就足以產(chǎn)生高轉(zhuǎn)染效率。
磁轉(zhuǎn)染的使用方法極簡單。最佳轉(zhuǎn)染條件對(duì)于不同細(xì)胞系或細(xì)胞可能不同,需要通過優(yōu)化確定最佳條件。優(yōu)化后的條件可反復(fù)用于轉(zhuǎn)染同一細(xì)胞系或細(xì)胞。要優(yōu)化的條件包括:轉(zhuǎn)染試劑與核酸或病毒的比例、核酸的量、細(xì)胞密度、孵育時(shí)間等。
1.產(chǎn)品特性
MagTransPoly是一種普遍適用的磁性顆粒制劑,用于高效核酸遞送。 它與待轉(zhuǎn)染的核酸以一步法混合,并已成功用于質(zhì)粒DNA、反義寡核苷酸和siRNA。產(chǎn)品具有如下特性:
n 產(chǎn)品為褐色澄清水膠體,規(guī)格10ml(濃度1mg/ml);
n 表面 Zeta 電位:pH 7.4 約+40 mV ;
n 磁性:具有超順磁性,飽和磁化強(qiáng)度約 60 emu/g ;
n 具有高的表面正電荷,因而具有高負(fù)載量及高轉(zhuǎn)染效率,膠體穩(wěn)定性好;
n 已采用 0.22 微米濾膜過濾除菌,在磁標(biāo)板作用下易被細(xì)胞吞噬,可用于 DNA 或 RNA 的高效轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究;
n 試劑盒中所有試劑請(qǐng)常溫保存(20-25°C)。第一次使用后請(qǐng)儲(chǔ)存于 4~8°C。常溫運(yùn)輸。磁性納米粒子勿冷凍,不要向儲(chǔ)存液中加入任何其它試劑。
2.使用方法
以下說明已成功應(yīng)用于各種細(xì)胞系的樣品方案。 請(qǐng)注意,最佳條件因細(xì)胞系而異。 因此,可調(diào)整所用DNA或RNA的量以及各個(gè)組分的比例以獲得最佳結(jié)果。 以下建議可用作指導(dǎo),以最短的孵育時(shí)間實(shí)現(xiàn)良好的轉(zhuǎn)染。
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