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1. 概述
PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁性納米粒子是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性，表面涂覆高密度醛基官能團(tuán)可永久共價(jià)偶聯(lián)含伯胺的配體。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠最適合與蛋白質(zhì)和小肽的偶合。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠可用于偶聯(lián)肽、蛋白、酶、抗體和氨基修飾的核酸等。PuriMagTM G-CHO醛基功能化磁珠適用于各種磁分離應(yīng)用，包括親和力富集、蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀和細(xì)胞分選。
特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：
w 偶聯(lián)條件：pH 4~10、4~25℃、2~16 h 偶聯(lián)較高效；
w 水不溶性配體可在終濃度為10~30％的丙酮、二惡烷或醇、二甲基甲酰胺（DMF）或二甲亞砜（DMSO）偶聯(lián)緩沖液中或在偶聯(lián)緩沖液中含6M鹽酸胍或4 M尿素；
w 穩(wěn)定的共價(jià)鍵和低水平的配體泄漏；
w 產(chǎn)生可重復(fù)使用的免疫親和基質(zhì)；
w 低非特異性結(jié)合；
w 固定1~50 mg蛋白質(zhì)或0.1~5mg肽/ g磁珠；
w 應(yīng)用：抗體、蛋白質(zhì)/肽、DNA / RNA的純化；細(xì)胞分選；免疫沉淀；
w 偶聯(lián)方便快速；
偶聯(lián)原理：
2. 產(chǎn)品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Aldehyde group
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10 mg/ml suspension in DI water
Stability
pH 3.5~10, 4~80 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 4~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是將將蛋白質(zhì)和/或肽偶聯(lián)至PuriMagTM醛基活化磁性納米粒子的示例。
強(qiáng)烈建議針對(duì)具體樣本優(yōu)化磁珠用量。如配體負(fù)載太低，則可能導(dǎo)致非特異結(jié)合。如配體負(fù)載過高，可能會(huì)導(dǎo)致空間位阻。建議每g磁珠使用1~50 mg蛋白或0.1~5 mg肽來(lái)制成親和基質(zhì)。該方案可相應(yīng)地按比例放大和縮小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動(dòng)操作）：用于容納12個(gè)單獨(dú)的1.5~2ml離心管（Mrack02）；用于容納2個(gè)50 ml離心管或2個(gè)15 ml離心管（目錄號(hào)Mrack03）
2）可溶配體偶聯(lián)緩沖液：0.1 M sodium phosphate, pH 7.0；
不可溶配體偶聯(lián)緩沖液：0.1 M sodium phosphate, pH 7, 10-30% acetone, or dioxane, or alcohols, or dimethylformamide (DMF), or dimethylsulfoxide (DMSO) or 6 M Guanidine?HCl or 4 M Urea ；
注意：偶聯(lián)緩沖液的離子強(qiáng)度對(duì)獲得更高的偶聯(lián)效率至關(guān)重要。偶聯(lián)緩沖液應(yīng)具有最小的離子強(qiáng)度，且不包含任何氨基（如Tris）或其他親核試劑。洗滌或儲(chǔ)存緩沖液可包含氨基。因?yàn)榍杌饸浠c有劇毒，所以請(qǐng)?jiān)诨瘜W(xué)通風(fēng)櫥中準(zhǔn)備緩沖溶液。
3）封閉緩沖液：1 M Tris?HCl, 0.05% NaN3, pH 7.4；
4）洗滌緩沖液：1 M NaCl, 0.05% NaN3；
5）氰基硼氫化鈉(5 M): NaCNBH3 dissolved in 1 M NaOH
B. 磁珠的準(zhǔn)備
注意：將PuriMagTM醛基磁珠按10mg/ml懸浮在水中，分散磁珠4 ℃保存。用前混勻。
1) 將2 mg磁珠轉(zhuǎn)移至EP管中。
2) 將EP管置于磁磁力架上1min，吸棄上清液，用50 ul偶聯(lián)緩沖液重新懸浮磁珠。
3) 重復(fù)步驟2三次。
注意：一旦水化，由于官能團(tuán)的穩(wěn)定性，應(yīng)盡快使用磁珠。
C. 蛋白質(zhì)偶聯(lián)
1）如果可溶，將50-200μg蛋白質(zhì)/肽溶解在100μl可溶性偶聯(lián)緩沖液中。如果不溶，則溶于100μl不溶偶聯(lián)緩沖液中。如果樣品已經(jīng)懸浮在其他緩沖液中，請(qǐng)用4倍體積的偶聯(lián)緩沖液稀釋樣品，或進(jìn)行脫鹽或透析，以將緩沖液更換為偶聯(lián)緩沖液。
注意：醛活化的磁珠的偶聯(lián)效率因配體而異。使用者應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)優(yōu)化配體的濃度。建議蛋白質(zhì)結(jié)合使用0.5~10 mg / ml。對(duì)于小肽，配體的濃度應(yīng)為每毫升至少200μmol配體。
2）在通風(fēng)櫥中，將蛋白質(zhì)溶液和1μl的NaCNBH3溶液（每毫升總體積10ul，最終濃度50mM）加入珠中。重懸磁珠并通過移液將其很好地混合。在室溫或4℃下連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育反應(yīng)過夜。
3）按照步驟B2所述，用1 ml偶聯(lián)緩沖液洗滌磁珠3次。
4）向PuriMagTM磁珠中添加0.1~0.5ml封閉緩沖液和0.5-1μl的NaCNBH3溶液（每毫升總體積10ul，最終濃度50 mM），在室溫下孵育1小時(shí)或在4℃下孵育過夜。
5）按照步驟2所述，用1 ml洗滌緩沖液洗滌小珠4-6次。
6）用0.1%的NaN3（w / v）將PuriMagTM磁珠重懸于PBS緩沖液中至所需濃度，并在4℃下儲(chǔ)存直至使用。不要凍結(jié)。
D. 一般親和純化方案
注意：設(shè)計(jì)通用的純化DNA或RNA的方案相對(duì)簡(jiǎn)單，因?yàn)楹怂岬纳匦韵鄬?duì)一致。但是，設(shè)計(jì)一種通用的親和純化方案非常困難，因?yàn)槊糠N蛋白質(zhì)都有不同的組成和結(jié)構(gòu)。為了獲得最佳結(jié)果，每個(gè)用戶都必須為各個(gè)應(yīng)用程序確定最佳工作條件。
1）將最適量的PuriMagTM磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。磁分離1~3分鐘，除去上清液。
注意：強(qiáng)烈建議根據(jù)粗樣品中目標(biāo)蛋白的量進(jìn)行滴定，以優(yōu)化用于每種應(yīng)用的磁珠的量。所用磁珠過多會(huì)導(dǎo)致較高背景，而所用磁珠太少則會(huì)導(dǎo)致較低產(chǎn)量。每mg的磁珠通常結(jié)合1~20 ug的目標(biāo)蛋白。
2）取下離心管，用5倍磁珠體積的PBS緩沖液懸浮30秒。磁分離1~3分鐘，除去上清。
3）重復(fù)步驟2兩次
4）將洗滌過的PuriMagTM磁珠加入含有目標(biāo)蛋白的粗樣品中，并在室溫或所需溫度下孵育1~2小時(shí)（較低的溫度需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間）。
5）用5倍磁珠體積的PBS緩沖液或1M NaCl充分洗滌磁珠，直到280 nm洗脫液的吸光度接近背景水平（OD 280 <0.05）。
6）通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ疵撃繕?biāo)蛋白，例如低pH（2~4）、高pH（10~12）、高鹽、高溫、親和洗脫或在SDS-PAGE上樣緩沖液中煮沸。
（本磁珠僅供科研使用?。?/span>
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