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樣品制備對于從生物樣品中提取大分子至關(guān)重要。細胞或組織的破碎方法很多,珠磨法是一種有效的細胞組織破碎方法。進入珠磨機內(nèi)的細胞懸浮液與極細的玻璃珠、氧化鋯珠、不銹鋼珠、石榴石等研磨料一起快速攪拌或研磨,利用破碎珠在高速運轉(zhuǎn)下的相互碰撞,可破碎微生物和動植物組織,釋放內(nèi)含物。該方法簡便穩(wěn)定、破碎率可控、易放大,無論實驗室還是工業(yè)規(guī)模,破碎效果十分理想。為避免樣品間交叉污染,珠子和離心管都是一次性的。研磨珠大小、形狀、材料和組成各不相同,在選擇合適研磨珠時,請考慮樣品類型、所需顆粒尺寸及目標(biāo)分子的穩(wěn)定性。無論您的樣品多堅韌,研磨珠將有效破壞細胞壁,在幾秒鐘內(nèi)提供最高產(chǎn)量的核酸和蛋白質(zhì)。
樣品的可變性:不同的樣品在珠磨均質(zhì)過程中的彈性不同。即使是中等彈性的樣品,也可以通過使用珠磨機,有效地進行均質(zhì)處理。一個有效的均質(zhì)化方法是在樣品質(zhì)量、容器體積、研磨介質(zhì)材料和尺寸之間找到平衡。對一個樣品有效的方法不一定對另一個樣品有效,所以通常需要進行一些方法開發(fā),以建立最佳方案,達到預(yù)期的目標(biāo)。
處理參數(shù):無論采用何種形式,樣品容器必須能夠承受研磨珠和球的沖擊。聚碳酸酯容器是一個很好的選擇,因為它們透明、耐用、耐沖擊,并有能力承受低溫。然而,由于聚碳酸酯與許多有機溶劑不相容,可使用耐受的聚乙烯或聚丙烯管和深孔板代替--盡管這些管子在與金屬研磨球一起使用時容易發(fā)生機械斷裂。
樣品的大小和類型:必須與適當(dāng)大的均質(zhì)容器和研磨介質(zhì)相匹配,共同有效地使樣品均質(zhì)。研磨介質(zhì)必須自由移動以磨碎樣品,因此,管子里不能裝太多的珠子或緩沖液。一般來說,樣品不應(yīng)超過容器容積的1/6;研磨介質(zhì)不應(yīng)超過1/3。
研磨介質(zhì)分類:珠子—— 一定尺寸分布的珠子。小珠子最適合于破壞較小尺寸樣品,如細菌或酵母;而較大的珠子或研磨球則最適用于植物和動物組織。球——精確到特定直徑的球形。(在某些緩沖液中,不銹鋼會與酚類化合物發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)不銹鋼與某些緩沖劑中的酚類化合物發(fā)生反應(yīng)時,可用陶瓷作為替代物)。陶瓷/研磨樹脂——尖銳和不規(guī)則形狀的復(fù)合材料。
高密度研磨介質(zhì),如不銹鋼和氧化鋯通常比玻璃珠更有效;但前者在研磨過程中易產(chǎn)生熱量。此外 一些從研磨珠上剪切下來的材料會抑制一些酶的反應(yīng)。因此,沒有一種介質(zhì)可適用于所有應(yīng)用。
一般來說,研磨介質(zhì)在使用前應(yīng)進行清洗以消除污染。酸洗是最常見的方法,盡管熱處理可消除潛在的核酸酶或核酸來源。也有低結(jié)合力的珠子可減少非特異性結(jié)合,從而使更多的分析物保持在懸液中。
低溫均質(zhì):一些難以研磨的樣品需進行低溫研磨。這種技術(shù)對于難以研磨的樣品和需要制備溫度敏感的樣品都很有用。
廈門普睿邁格生物科技有限公司提供適合于各種不同研磨器的配套研磨珠子,可以滿足生物細胞及組織樣品研磨工作中的不同需求。
產(chǎn)品名稱
型號
尺寸
包裝
應(yīng)用對象
Glass beads
玻璃研磨珠
PMGB-G-001
0.1 mm
500 g / 瓶
微生物、細菌、環(huán)境樣品(空氣、水、土壤、沉積物和支持生物膜)
PMGB-G-005
0.5 mm
酵母、環(huán)境樣品(空氣、水、土壤、沉積物和支持生物膜)
PMGB-G-010
1.0 mm
PMGB-G-025
2.5 mm
真菌、真菌體
PMGB-G-035
3.5 mm
真菌、真菌體、動物軟組織(如血液、肝臟、大腦和胸腺)、纖維組織
PMGB-G-064
6.4 mm
植物葉片、植物莖、植物種子、動物組織、真菌、真菌體
Zirconium beads
氧化鋯研磨珠
PMGB-Z-001
100 g / 瓶
微生物、細菌、環(huán)境樣品(空氣、水、土壤、沉積物和支持生物膜)、植物花粉
PMGB-Zr-002
0.2 mm
酵母
PMGB-Zr-005
植物花粉
PMGB-Zr-010
真菌、絲狀真菌、植物花粉
PMGB-Zr-020
2.0 mm
真菌、假菌絲體
PMGB-Zr-030
3.0 mm
PMGB-Zr-040
4.0 mm
PMGB-Zr-070
7.0 mm
PMGB-Zr-100
10.0 mm
植物葉片、植物莖、植物種子、動物組織
Stainless steel beads
不銹鋼研磨珠
PMGB-S-010
PMGB-S-020
真菌、真菌體、植物葉片、植物莖、動物軟組織
PMGB-S-030
真菌、真菌體、植物葉片、植物莖、動物軟組織(如血液、肝臟、大腦和胸腺)、纖維組織
PMGB-S-040
植物葉片、植物莖、動物軟組織(如血液、肝臟、大腦和胸腺)、纖維組織
PMGB-S-095
9.5 mm
PMGB-S-110
11.0 mm
Garnet flakes/beads
石榴石研磨珠
PMGB-GF-007
0.7 mm
動物軟組織(如血液、肝臟、大腦和胸腺)、纖維組織
部分客戶使用該產(chǎn)品論文:
[1] 易明玉. Linc-ROR通過調(diào)節(jié)miR-204-5p/SMAD4促進子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[D].中南大學(xué),2022.DOI:10.27661/d.cnki.gzhnu.2022.000448. [2] 吳黎. 基于Wnt/β-catenin通路對回陽生肌膏治療糖尿病大鼠陰證創(chuàng)面的作用機制研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué),2021.DOI:10.26973/d.cnki.gbjzu.2021.000330.
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