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一、概述
Epoxy 活化瓊脂糖磁珠（Magarose-Epoxy）是PuriMag公司新開發(fā)的活化好的磁珠，它采用平均粒徑為20-45μm 的6%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠，表面用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，用它合成的親和磁珠，它避免蛋白之間位阻以及蛋白和填料的位阻干擾，使其同等配基下有更高載量，同時(shí)有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，抗體等大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變?？梢栽谒嗷蛘哂袡C(jī)相中偶聯(lián)，提供的該Epoxy 瓊脂糖磁珠已經(jīng)完全溶脹為即用凝膠磁珠。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-Epoxy，Magarose-A-Epoxy
貨號(hào)
PMAG014，PMAG 015
磁珠濃度
25% (v/v) in 50% DMSO
配基密度
60~70 μmol Epoxy/ ml磁珠
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
>20 mg BSA/ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。
三、使用方法
1. 產(chǎn)品特點(diǎn)
w 偶聯(lián)條件溫和（pH8-10，溫度4-45℃，時(shí)間1-16小時(shí)，可以在水相或有機(jī)相中偶聯(lián)），偶聯(lián)效率高（配基密度60-70 μmol/mL）。
w 磁珠不需要處理，直接計(jì)算合適的量用于偶聯(lián)，縮短時(shí)間。
w 保存時(shí)間長(zhǎng)，-20℃可以保存2年，不能夠受潮。
w 剛性強(qiáng)，流速快(300 cm/h，100 kpa)。
w 可偶聯(lián)含有氨基、巰基、羥基的多糖，蛋白，核酸，抗體等配基，應(yīng)用范圍廣。
w 偶聯(lián)后制備的親和填料壽命長(zhǎng)，流速快，特異性高。
2. 蛋白偶聯(lián)操作步驟
以用該Epoxy 瓊脂糖磁珠偶聯(lián)牛血清白蛋白（BSA）為例：
1) 取20 ml活化瓊脂糖磁珠，磁分離，50ml去離子水洗滌三次。磁分離，去除上清。
2) 取BSA 100 mg 溶解于10 mL的pH9.0的 0.25M 碳酸鈉緩沖液中。
3) 將BSA 溶液加入磁珠中混合，在搖床上振蕩，25℃偶聯(lián)6小時(shí)。
4) 然后加50 mg 甘氨酸，再反應(yīng)6個(gè)小時(shí)封閉剩余的基團(tuán)。
5) 偶聯(lián)了BSA 的磁珠，用1 M NaCl 溶液洗3-5次，收集偶聯(lián)后剩余的液體以及洗滌的溶液測(cè)定BSA 的總量，再用純水洗滌磁珠3次，最后將磁珠保存在相應(yīng)蛋白保存緩沖液中。
6) BSA 的偶聯(lián)量為25 mg/ml. 計(jì)算方法：BSA 的吸附載量=（G0—G1）/V。
G0：BSA 總使用量，單位：mg；
G1：偶聯(lián)反應(yīng)后未偶聯(lián)的 BSA 的量，單位：mg；
V：填料的體積，單位：mL；
注：該偶聯(lián)方法可用于偶聯(lián)單抗及其它蛋白，均能獲得很好的偶聯(lián)效果。偶聯(lián)的物質(zhì)如果是小分子的例如氨基酸或其他帶-NH2、-SH、-OH等基團(tuán)的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05M NaOH中配置成10-20mg的溶液，其他條件不變。也可以提高偶聯(lián)的溫度，這樣可以偶聯(lián)密度更高。
3. 注意事項(xiàng)
1) 活化的磁珠現(xiàn)取現(xiàn)用，以免時(shí)間過長(zhǎng)造成偶聯(lián)活性降低?？梢?20℃密封保存，這樣可以保存放2 年。如果要偶聯(lián)的蛋白不穩(wěn)定，可在搖床上4℃振搖偶聯(lián)12-16小時(shí)，以維持配基的活性。如果沒有把握可以配相應(yīng)濃度的配基溶液0.5-1mL，分別選擇不同pH 及溫度然后不加填料模擬偶聯(lián)條件，到時(shí)間觀察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶聯(lián)效果就不好，這時(shí)可以稍微降低pH 或溫度，同時(shí)可以加5%左右的甘油或PEG 保護(hù)蛋白,避免沉淀，總之對(duì)于任何配基最好能了解其溶解性及穩(wěn)定性，避免實(shí)驗(yàn)失敗導(dǎo)致?lián)p失。
2) 偶聯(lián)配基后盡快清洗磁珠，避免在高pH 條件中，配基失活。
3) 更穩(wěn)定的配基可以直接溶解于NaOH 溶液或者碳酸鈉溶液中進(jìn)行偶聯(lián)，溫度可適當(dāng)提高，偶聯(lián)時(shí)間則相應(yīng)縮短至1-4小時(shí)。
4) 偶聯(lián)蛋白的最適pH 為可以在8.0-10 左右，在室溫或4℃均可，溫度與pH 的提高均能增加配基的吸附載量，根據(jù)蛋白的穩(wěn)定選擇合適的pH 和溫度，偶聯(lián)蛋白溶液的濃度為5-20 mg/ml。磁珠體積和配基溶液的體積為1：1.5 或者為1：2。
5) 偶聯(lián)的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對(duì)不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物質(zhì)。
6) 偶聯(lián)的物質(zhì)如果是小分子化合物，例如氨基酸或其他帶-NH2、-SH、-OH 等基團(tuán)的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05 M NaOH 中配置成10-20 mg/mL 的溶液，其他條件不變。也可以提高偶聯(lián)的溫度，這樣可以偶聯(lián)密度更高。
7) 在偶聯(lián)中要把磁珠能混勻完全懸浮起來即可，避免劇烈攪拌使填料有小顆粒降低流速。
8) 本試劑只能夠用于體外實(shí)驗(yàn)，不能夠用于臨床、治療和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等，由此產(chǎn)生的后果概不承擔(dān)責(zé)任。
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1. Jiang S, Lin Y, Zheng S. Development of the IMP biosensor for rapid and stable analysis of IMP concentrations in fermentation broth[J]. Biotechnology Journal, 2024, 19(6): 2400040. （瓊脂糖磁珠偶聯(lián)蛋白）
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