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【產(chǎn)品介紹】
磁珠法質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一種細(xì)菌質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒。本產(chǎn)品將磁性納米分離技術(shù)和細(xì)菌細(xì)胞的SDS堿裂解法結(jié)合從菌體中提取高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。在離心力的作用下細(xì)胞碎片和SDS復(fù)合物沉淀下來。在一定的條件下磁珠能很好的吸附存在于上清中的質(zhì)粒DNA，其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、鹽離子等通過洗滌被除去。當(dāng)條件改變時，磁珠釋放吸附的質(zhì)粒DNA。對于高拷貝質(zhì)粒，從2 ml過夜培養(yǎng)的菌液（OD600 = 2.0）中可以獲得超過15 μg的質(zhì)粒DNA。由本試劑盒抽提得到的質(zhì)粒純度高，OD260/OD280比值一般為1.7~1.9之間，OD260/OD230比值大于2.0，可直接用于轉(zhuǎn)化、DNA測序、PCR、基于PCR的突變、體外轉(zhuǎn)錄和酶切等后續(xù)實(shí)驗。
【特點(diǎn)】
l 對于高拷貝質(zhì)粒，從2 ml過夜培養(yǎng)菌液（OD600 = 2.0）中可獲得超過15 μg的質(zhì)粒DNA；
l 與同類產(chǎn)品相比，提取效率更高，獲得質(zhì)粒的純度更高；
l 與柱式法相比，可大大減少離心次數(shù)，獲得完整性更好的質(zhì)粒；
l 可以同時處理多個樣品，實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒提取的高通量化和自動化。
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads和RNase A置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團(tuán)，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Resuspension solution
20 ml
常溫
Lysis buffer
Neutralization solution
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當(dāng)于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時使用去離子水，比值會偏低，因為pH和離子會影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
分菌→
1) 取1~1.5 ml過夜培養(yǎng)的大腸桿菌于2 ml微量離心管中，4℃下9000 rpm離心0.5分鐘，盡量吸干培養(yǎng)液；
懸菌→
2) 加200 ul Resuspension solution和20ul RNaseA懸浮細(xì)菌，充分混和均勻；
裂解→
3) 加200 ul Lysis buffer，蓋緊管口，輕緩上下4-6次顛倒離心管以使溶液變透明、粘稠），室溫靜置3-5min至完全裂解。
中和→
4) 加200 ul 冰預(yù)冷的Neutralization solution，蓋緊離心管口后上下輕緩顛倒4-6次，加入50 ul異丙醇。
結(jié)合→
5) 4 ℃下13000 rpm離心5 min，小心吸取500ul上清液至新的1.5 ml離心管（300 ul異丙醇與20 ul PuriMag bead預(yù)先在離心管中混勻）；吹打3~5次，放置5 min; 將離心管放到磁力架上靜置10s，小心吸棄上清。
洗滌→
6) 向離心管中加入700 ul Wash buffer，移液槍吹打混勻，將離心管放到磁力架上靜置10 s，小心吸棄上清。重復(fù)該步驟一次。倒置離心管2~3 min，室溫晾干5 min，讓殘留乙醇揮發(fā)干凈，以免影響后續(xù)實(shí)驗。
洗脫→
7) 向離心管中加入50-100 ul Elution buffer，移液槍吹打混勻1-2 min。（Elution buffer在65-70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度）將離心管放到磁力架上靜置10 s，小心吸走上清液放入新離心管中，即為提取的質(zhì)粒DNA，可存放于2~8 ℃，長期存放需放置于-20 ℃。
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