客戶采用我司羧基磁珠（G-COOH）偶聯(lián)抗體——論文通訊
本研究旨在畢赤酵母中表達雞傳染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重組VP3蛋白作為包被抗原建立IBDV血清抗體免疫磁珠間接ELISA檢測方法并進行初步應(yīng)用。利用畢赤酵母表達系統(tǒng)獲得約為39 ku的重組VP3蛋白,Western-blotting檢測表明,重組VP3蛋白具有良好的特異性和反應(yīng)原性。免疫磁珠間接ELISA的最佳反應(yīng)條件:PuriMag G-COOH磁珠和抗原偶聯(lián)的緩沖液是50 mmol/L MES(p H 8.0),偶聯(lián)時間為3 h,抗原加入量為95μg,抗原與羧基磁珠最大偶聯(lián)量為80μg。待檢血清和酶標二抗的稀釋度分別為1∶1 600和1∶4 000,血清孵育時間為30 min,酶標二抗孵育時間為20 min。在該優(yōu)化條件下,陰性、陽性臨界值判定標準為0.134。特異性試驗顯示,對抗AIV、IBV、MDV、NDV陽性血清檢測結(jié)果均為陰性。敏感性試驗顯示,本試驗所建立的檢測方法敏感性高于商品化IBDV血清抗體檢測試劑盒。重復(fù)性試驗顯示,批內(nèi)和批間重復(fù)試驗的最大變異系數(shù)分別為3.8%和5.9%。穩(wěn)定性試驗結(jié)果顯示變異系數(shù)小于7%。用建立的檢測方法和商品化IBDV血清抗體檢測試劑盒同時檢測50份血清,結(jié)果顯示兩種檢測方法的相對敏感性為94.6%,相對特異性為92.3%,符合率為94.0%。本試驗建立的檢測方法具有敏感性高、特異性強、重復(fù)性好、穩(wěn)定性高特點,為其應(yīng)用于臨床IBDV血清抗體的檢測奠定了基礎(chǔ)。
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