鏈霉親和素（streptavidin，SA）與親和素（avidin）的比較
一、親和素與鏈霉親和素概述
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。親和素主要包括卵白親和素、鏈親和素、卵黃親和素及類親和素等。后兩種因其特異性親和力低，研究不多，前兩種目前已深入研究并得到廣泛應(yīng)用。
親和素又稱卵白素或抗生物素，分子量為68000，pI 10～10.5；在pH9～13緩沖液中性質(zhì)均穩(wěn)定，耐熱并耐多種蛋白水解酶的作用。天然親和素為堿性蛋白，由4個(gè)相同的亞單位構(gòu)成4聚體；每個(gè)親和素亞單位通過其結(jié)構(gòu)中的色氨酸殘基與生物素中的Ureido環(huán)（I環(huán)）結(jié)合。因此，1個(gè)親和素分子存在4個(gè)與生物素分子結(jié)合位點(diǎn)，其結(jié)合常數(shù)（Ka）高 達(dá)1015mol/L。通常，親和素的活性單位是以親和素結(jié)合生物素的量來表示的，即以能結(jié)合1ug生物素所需要的親和素量為1個(gè)親和素活性單位。一般1ug親和素約含13～15個(gè)活性單位。
鏈霉親和素（streptavidin，SA）是從鏈霉菌streptomyces avidinii培養(yǎng)物中提取的一種分泌性蛋白質(zhì)，分子量為65kDa，等電點(diǎn)6.0。鏈霉親和素分子由4條相同的肽鏈組成，其氨基酸組成中，甘氨酸和丙氨酸的含量較大，而且結(jié)合生物素的活性基團(tuán)也是肽鏈中的色氨酸殘基；鏈霉親和素是一種稍偏酸性（pH6.0）的蛋白質(zhì)，不帶任何糖基。
鏈霉親和素是四聚體蛋白，一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合。鏈霉親和素與生物素之間的親和力極為強(qiáng)烈，親和常數(shù)（K）為1015mol/L。鏈霉親和素-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于10mol/L數(shù)量級(jí)。因此鏈霉親和素是一種非常完美的生物素結(jié)合蛋白，鏈霉親和素的適用范圍也比親和素更為廣泛。
SA與A的ka雖然相同，但在實(shí)際應(yīng)用中其檢測(cè)靈敏度明顯優(yōu)于A，其原因是SA為略偏酸性的蛋白。SA的每條肽鏈含159個(gè)氨基酸殘基，其中賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸的含量比一般親合素少，反之含酸性氨基酸較多，其等點(diǎn)為6.0，較A（pI=10）為低，同時(shí)在結(jié)構(gòu)中SA不含任何糖基，而A含糖可高達(dá)10%。A的高pI及高含糖結(jié)構(gòu)導(dǎo)致在聚苯乙烯板和硝酸纖維素膜上或與組織細(xì)胞DNA結(jié)合時(shí)，易產(chǎn)生一定程度的非特異性結(jié)合，造成較高的顯色背景，而SA較A在應(yīng)用中明顯克服了這一缺點(diǎn)。
SA最高的活性可達(dá)18u，較A高（15u）；與A一樣，每個(gè)SA分子也具有4個(gè)可與生物素分子結(jié)合位點(diǎn)，故其效應(yīng)相同。
1、相同點(diǎn)
（1）與生物素的結(jié)合能力：親和素（AV）為13-15U，鏈霉親和素（SA）為14-18U。
（2）活性中心依賴于色氨酸-賴氨酸：親和素在氨基酸序列的70-71和110-111兩個(gè)位點(diǎn)有色氨酸-賴氨酸，鏈霉親和素在氨基酸序列的79-80和120-121兩個(gè)位點(diǎn)含有色氨酸-賴氨酸。
2、不同點(diǎn)
（1）分子量：親和素為68KDa，鏈霉親和素為65KDa。
（2）等電點(diǎn)：親和素為10.5，鏈霉親和素為6.0。親和素帶正電較多，非特異性結(jié)合較強(qiáng)。
（3）位阻效應(yīng)：鏈霉親和素的生物素結(jié)合位點(diǎn)較親和素深，位阻效應(yīng)較強(qiáng)，長(zhǎng)臂生物素更適合。
（4）生物素的結(jié)合：親和素隨機(jī)結(jié)合，鏈霉親和素協(xié)同結(jié)合。
（5）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)：親和素含二硫鍵和10%糖，鏈霉親和素含甘氨酸丙氨酸較多，無糖和二硫鍵。
鏈霉親和素產(chǎn)品 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/9056422651.html
1、標(biāo)記化鏈霉親和素
用酶或熒光素等修飾鏈霉親和素，應(yīng)用于ELISA放大檢測(cè)信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。
（1）異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記鏈霉親和素
熒光素是目前廣泛用于免疫病理、細(xì)胞化學(xué)、流氏細(xì)胞、病理等方面的免疫標(biāo)記試劑。將異硫氰酸熒光素（FITC）共價(jià)交聯(lián)到鏈霉親和素分子的氨基基團(tuán)上，經(jīng)過純化、蛋白定量、FITC濃度及效價(jià)鑒定制備而成。
（2）辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素
將鏈霉親和素直接或間接預(yù)包被在酶標(biāo)板上，穩(wěn)定性高，易于保存，使用時(shí)只要加入生物素化的抗體或者抗原即可。
鏈霉親和素磁珠由磁微粒與高純度鏈霉親和素共價(jià)結(jié)合而成。磁珠可用于捕獲生物素標(biāo)記的底物，包括生物素標(biāo)記的抗原、抗體和核酸。生物素-鏈霉親和素的相互作用很強(qiáng)，非特異性結(jié)合率很低，使得被捕獲的底物可滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。鏈霉親和素磁珠逐漸取代鏈霉親和素酶標(biāo)板成為鏈霉親和素在分子診斷、細(xì)胞篩選等應(yīng)用領(lǐng)域的首選方案。生產(chǎn)鏈霉親和素磁珠的廠家很多，就筆者用過的較好的進(jìn)口產(chǎn)品有Dynal、GE、Promega等國(guó)際品牌，但價(jià)格昂貴，值得一提的是國(guó)內(nèi)的PuriMag 的鏈霉親和素磁珠，在生物素結(jié)合量、背景噪音、穩(wěn)定性和磁響應(yīng)性等方面均可全面與國(guó)際品牌相媲美，對(duì)于注重性價(jià)比的企業(yè)和研究單位，是制得選擇的。
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