蛋白質(zhì)純化用瓊脂糖磁性微球(Magarose)選擇指南
瓊脂糖磁性微球的工作流程非常簡單。要獲得純化的蛋白質(zhì)，只需按照圖 1 中描述的六個步驟操作即可。
圖 1：使用磁珠/磁珠的標準蛋白質(zhì)純化程序的工作流程。
Magarose瓊脂糖磁珠純化蛋白工作流程：
步驟1：Magarose 蛋白純化的起點通常是細胞裂解物，細胞裂解液中含有感興趣的目標蛋白。
步驟2：從儲存緩沖液中取出Magarose 瓊脂糖磁性微球，并用洗滌緩沖液洗滌兩次。向裂解物中加入適量的磁珠。我們建議您使用無菌移液器吸頭。
步驟3：緩慢振蕩混合 Magarose/蛋白質(zhì)混合物。沒有漩渦！ 在室溫下持續(xù)約 2 小時就足夠了。
步驟4：幾乎所有感興趣的蛋白質(zhì)都應該與Magarose瓊脂糖微球結(jié)合。同樣，重要的是使用比目標蛋白質(zhì)更多的Magarose瓊脂糖微球，以確保最大的結(jié)合效果。
步驟5：磁分離Magarose瓊脂糖微球，進而將目標蛋白質(zhì)與裂解物的其余部分分離。對于微量離心管和大規(guī)模純化，我們建議使用實用的PuriMag磁分離器。步驟6：小心移除上清液以避免意外移除某些磁珠?，F(xiàn)在用洗滌緩沖液洗滌結(jié)合的蛋白質(zhì)至少兩次。
最后，用洗脫緩沖液洗脫蛋白質(zhì)。用洗脫緩沖液緩慢而穩(wěn)定地渦旋磁珠，以洗脫所有結(jié)合的蛋白質(zhì)。
自選：額外的洗滌步驟將提高蛋白質(zhì)的純度。不同類型的磁珠可能需要不同種類的洗滌緩沖液。要了解如何制備Magarose的相應洗滌緩沖液，請參閱我們的實驗方案。磁珠的優(yōu)點詳解
與非磁性親和基質(zhì)相比，使用磁珠進行蛋白質(zhì)純化具有許多優(yōu)點。同時，有許多不同的產(chǎn)品具有不同的功能和優(yōu)勢。這個簡短的總結(jié)將支持您為您的研究找到最佳產(chǎn)品。
圖2（左或上）：磁珠的方案。磁芯都非常一致。圖3（右或下）：200倍放大倍率下的Magarose磁珠。
磁珠如何純化蛋白質(zhì)？
磁珠本身不能與蛋白質(zhì)相互作用。它必須裝滿離子。不同的金屬離子導致 His 標記蛋白的親和力和特異性不同。通過親和層析純化蛋白質(zhì)最常用的工具是NTA-Ni配體（圖2）。次氮基三乙酸 （NTA） 配體與磁珠等基質(zhì)偶聯(lián)，然后加載離子。離子與特定的標記蛋白質(zhì)相互作用（例如，6 倍的標記蛋白質(zhì)）。在圖4中，鎳離子被加載到磁珠中。雖然鎳離子是淺藍色的，但由于磁芯的存在，磁珠呈現(xiàn)黑色。磁芯
用于蛋白質(zhì)純化的磁珠包含一個由磁鐵礦制成的磁芯，該磁芯覆蓋在不同的材料中。磁珠通常是鐵磁性（或鐵磁性）或超順磁性的。鐵磁/鐵磁磁芯通常很大（>30 nm），并顯示出強磁矩。即使在磁場消除后，它們?nèi)员Ａ舸舜啪亍＿@種效應稱為“剩磁”。強磁場導致磁珠在磁場中的快速分離。同時，它們有時會表現(xiàn)出自磁性，并可能附著在金屬表面上。默認情況下，PureCube 磁珠是亞鐵磁性的。
超順磁磁性磁芯較?。?-30 nm），磁矩較弱。當外部磁場被移除時，磁珠會失去磁性。磁珠在磁場中的分離通常需要更長的時間或效率較低。同時，便于與金屬表面一起使用。如果您需要超順磁磁珠，請隨時與我們聯(lián)系。
Magarose瓊脂糖磁珠屬性
對于我們的標準磁珠，我們選擇了以下特性，為大多數(shù)應用提供最佳結(jié)果。但是，如果需要，我們可以提供一系列定制的磁珠。標準品：中等尺寸的磁珠 （20-40 μm），帶亞鐵磁芯和瓊脂糖包衣：用于高蛋白結(jié)合、低非特異性結(jié)合和高效分離
XL：可提供用于特殊應用的大或超大磁性瓊脂糖珠（70-120 μm 或高達 400 μm），也可以使用您選擇的親和配體修飾其他市售磁性載體。 聯(lián)系我們以了解更多信息。
定制磁珠
如果您對磁珠的需求超出了市場上的常見范圍，您可以聯(lián)系我們并描述您的磁珠在實驗中需要哪些特定功能。我們已經(jīng)完成了大量關(guān)于磁珠的定制訂單。查看此概述，了解可能的情況。例如，您可能對以下功能感興趣，需要自定義：
表面化學
磁芯可以覆蓋在一系列不同的材料中，提供不同的性能。瓊脂糖形成具有中性電荷的三維親水網(wǎng)。與非磁性瓊脂糖類似，它非常適合與蛋白質(zhì)結(jié)合，例如通過親和配體。較大的相互作用表面導致高結(jié)合能力。中性表面減少了非特異性結(jié)合。
聚苯乙烯基珠具有羧基化表面，可以相當粗糙（通過添加羧酸鹽刷），也可以相當光滑。這兩種變體有時都顯示出與蛋白質(zhì)的非特異性結(jié)合。它們可用于蛋白質(zhì)結(jié)合的表面積小于瓊脂糖包被的微珠，因此它們的尺寸通常較?。?-2μm）以提供相同的結(jié)合能力。
二氧化硅微珠最廣泛用于核酸純化。它們在pH值下帶負電，并且在蛋白質(zhì)純化中通常顯示非特異性結(jié)合。
大小
磁珠有不同的尺寸，這對處理和純化結(jié)果有影響。小微珠 （1-10 μm）：為蛋白質(zhì)純化提供高表面積，但磁場較小，會對分離產(chǎn)生負面影響，尤其是從粘性溶液中分離。
中等微珠 （20-40 μm）：提供高效分離和大表面積。當與瓊脂糖表面結(jié)合時，結(jié)合能力可以與小聚乙烯基微珠相同。
大微珠 （70-120 μm）：在特殊應用中具有優(yōu)勢，例如當純化方法同時包含磁分離和過濾時。當與瓊脂糖表面結(jié)合時，結(jié)合能力仍然很高。
磁珠產(chǎn)品
PuriMag提供許多不同的Magarose磁珠產(chǎn)品。我們想給您一個簡短的概述：您的產(chǎn)品未列出？沒問題，我們可以為您制造！
產(chǎn)品
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His affinity Ni-NTA, Co-NTA, INDIGO, Ni-IDA |
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Phosphopeptide enrichment Fe-NTA, Ti-NTA, Zr-NTA, Al-NTA |
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Special IMAC resins Cu-NTA, Zn-NTA |
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Custom IMAC resins IDA, NTA |
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Activated resins NHS, Maleimide, Carboxy, Epoxy, Amine |
| Streptactin |
| Glutathione |
| Rho1D4 |
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