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鏈霉親和素(
streptavidin,SA)是由鏈霉菌streptomyces avidinii分泌的一種蛋白質(zhì),分子量為54kD。鏈霉親和素分子由4條相同的肽鏈組成,其氨基酸組成中,甘氨酸和丙氨酸的含量較大,而且結(jié)合生物素的活性基團也是肽鏈中的色氨酸殘基;鏈霉親和素是一種稍偏酸性(pH6.0)的蛋白質(zhì),并且不帶任何糖基。
鏈霉親和素分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個生物素,因此與親和素一樣,一個鏈霉親和素分子也能結(jié)合4個生物素分子,二者親和常數(shù)(K)亦為1015L/mol。在蛋白水解酶作用下,鏈霉親和素可在N端10~12和C端19-21間斷裂,形成的核心鏈霉親和素仍然保持完整的結(jié)合生物素的能力。鏈霉親和素的活性單位也是以結(jié)合1μg生物素所需的量來表示,1mg鏈霉親和素的最高活性可達18U。
相同點
1、 生物素結(jié)合能力:AV:13~15U,SA:14~18U
2、 活性中心依賴于色氨酸
-懶氨酸:親和素在氨基酸序列的70-70和110-111兩個位點有色氨酸-懶氨酸,鏈霉親和素在氨基酸序列的79-80和120-121兩個位點含有色氨酸-懶氨酸。
不同點:
1、 分子量:AV=66KD, SA=54KD
2、 等電點:AV=10.5, SA=6.0, AV帶正電較多,非特異性結(jié)合較強。
3、 位阻效應:SA的生物素結(jié)合位點較AV深,位阻效應較強,長臂生物素更適合。
4、 生物素的結(jié)合:AV隨機結(jié)合,SA協(xié)同結(jié)合。
5、 氨基酸序列:AV含二硫鍵和10%糖,SA含甘氨酸丙氨酸較多,無糖和二硫鍵。
酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體,②酶標記的抗原或抗體,③酶作用的底物。
根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。
生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)在ELISA中的應用有多種形式:
1、用于間接包被:可以在固相上先預包被
鏈霉親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合,通過
鏈霉親和素-生物素反應而使生物素化的抗體或抗原間接包被。這種包被法主要有以下優(yōu)點:
① 增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結(jié)合點充分暴露。
② 陰性對照、空白對照本底低,檢測敏感性高。
③ 用
鏈霉親和素替代抗體包被微孔,避免了抗體包被微孔時容易發(fā)生失活
(或不易保存)。
④ 通過生物素將抗體結(jié)合于
鏈霉親和素包被的
酶標板上,可克服傳統(tǒng)物理吸附方法造成的抗原抗體結(jié)合能力大量喪失的不足。
⑤ 生物素標記捕獲抗體、酶標指示抗體和樣品中的抗原三者在均相中形成復合物后,再通過生物素結(jié)合于鏈霉親和素包被的酶標板上,由于鏈霉親和素和生物素之間親和力極強,并且具有高度的特異性和穩(wěn)定性,因而可提高檢測靈敏度。
實例:CTnT檢測實驗中,雙抗體夾心ELISA法最低檢測值為7.25μg/L,使用鏈霉親和素包被法最低檢測值達到1.0μg/L,較雙抗體夾心ELISA法靈敏度提高7倍。
2、 用于終反應放大:在常規(guī)ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代,然后連接親和素-酶結(jié)合物,以放大反應信號。
由于SA的等電點低,表面帶的正電荷少,因此它和聚苯乙烯板載體的靜電吸附力弱,SA的陰性對照顯色明顯比AV低,這樣在ELISA上應用SA可進一步提高方法的靈敏度。鏈霉親和素對生物素化的抗體是一個主動的吸附過程,生物素化的抗體吸附在鏈霉親和素表面,抗體排列整齊,分布均勻,抗體容易保持功能,而被動吸附抗體排列極不規(guī)則容易導致大量抗體失去功能,所以將生物素-鏈霉親和素免疫反應系統(tǒng)引入競爭法中,可以大大提高酶聯(lián)免疫的靈敏度和特異性。
實例
1: 地高辛的生物素-鏈霉親和素免疫法測定實驗中,傳統(tǒng)方法被動吸附只有約5% 的抗體具有功能 ,生物素-鏈霉親和素體系中60% 的抗體具有功能。
實例
2:淋球菌抗原測定方法實驗中,生物素-鏈霉親和素法檢測靈敏度為0.625 μg/L,相當于3.5×104/ml淋球菌,而同時進行常規(guī)ELISA測定時,其靈敏度為1.25 μg/L。
用
酶或熒光素等修飾
鏈霉親和素,應用于ELISA放大檢測信號,提高檢測靈敏度。
產(chǎn)品實例:
將
鏈霉親和素直接或間接預包被在
酶標板上,穩(wěn)定性高,易于保存,使用時只要加入生物素化的抗體或者抗原即可。
鏈霉親和素磁珠由
超順磁微粒與高純度鏈霉親和素共價結(jié)合而成。磁珠可用于捕獲生物素標記的底物,包括生物素標記的抗原、抗體和核酸。由于生物素-鏈霉親和素的相互作用很強,其結(jié)合常值(Ka)為 1015 M-1,并且鏈霉親和素的非特異性結(jié)合率很低,使得被捕獲的底物可滿足后續(xù)實驗要求,包括 mRNA 的分離和一抗、二抗的獲得。
產(chǎn)品實例:
產(chǎn)品描述:
鏈霉親和素包被的PuriMag G磁珠為分離生物素抗體、核酸或其他生物素配體和靶分子的最佳選擇。這種鏈霉親和素-生物素的高親和力 ( Kd值10-15 )在分子上有著廣闊的應用。磁珠是單層而不是多層的鏈霉親和素重組體。這對自由生物素或生物素配體和靶分子而言,在空間排列有著絕大多數(shù)的生物素結(jié)合位點。沒有過量的物理吸附鏈霉親和素確保了只有微量的鏈霉親和素會遺漏。批次間變化小,結(jié)果重復性好。
優(yōu)點和特性:
? 直接快速捕獲任何生物素靶分子
? 靈活的固相操作和優(yōu)化的液相反應動力學
? 磁性操作易于適應自動化平臺
? 批次重復性高,結(jié)果可靠一致
應用:
PuriMag G-Streptavidin已達到了前所未有的廣泛應用。主要應用在制備單鏈DNA模板,分離RNA和DNA結(jié)合蛋白,固定長鏈DNA片段,純化測序產(chǎn)品,特效捕獲核酸。
濃度:10mg/ml
儲存條件:2-8℃
結(jié)合能力:
磁珠的結(jié)合能力由DNA片段長度決定。 1mg磁珠結(jié)合4,000 pmoles自由生物素,400 pmoles生物素標記的核苷酸(單鏈) ,10 - 20μg生物素標記抗體和10 pmoles的2 - 4 kb雙鏈DNA片段。
中文名稱:PuriMag鏈霉親和素磁珠
更多請參考:http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/8271042221.html