Protein A磁珠, Protein G磁珠, Protein L磁珠, Protein A/G磁珠, Protein A/G/L磁珠的抗體結(jié)合能力比較
Protein A、Protein G、Protein L、Protein A/G和Protein A/G/L常被固定到磁珠上,用來親和純化免疫球蛋白,PuriMag G系列蛋白磁珠是純化大多數(shù)免疫球蛋白的理想工具。不同的蛋白對不同來源的抗體親和能力是有差異的,為便于用戶了解和選擇相應(yīng)系列蛋白磁珠,下表列出了Protein A、Protein G、Protein L、Protein A/G和Protein A/G/L分別與不同免疫球蛋白的親和能力。
1. 蛋白 A
蛋白A (Protein A) 是金黃色葡萄球菌的一個(gè)株系的細(xì)胞壁蛋白,它通過Fc區(qū)與哺乳動物的IgG結(jié)合,天然的Protein A,42kDa,含有四個(gè)Ig Fc結(jié)合位點(diǎn),其中2個(gè)是有活性的,而用于純化抗體的,一般是重組的protein A,含有4個(gè)Ig Fc區(qū)域結(jié)合位點(diǎn)。
蛋白A作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上即蛋白A瓊脂糖(protein A agarose),可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合,而使其他雜蛋白不結(jié)合,具有極高的選擇性。1個(gè)蛋白A分子至少可以結(jié)合2個(gè)IgG。天然蛋白A 和重組的蛋白A對于IgG的Fc段有著相似的特異結(jié)合。但重組的蛋白A經(jīng)改造后含有一個(gè)C末端半胱氨酸,可以單一位點(diǎn)偶聯(lián)于瓊脂糖上,降低了空間位阻,增加了與抗體的結(jié)合能力。蛋白A與IgG的結(jié)合強(qiáng)度很大成度上依賴于該抗體的種屬和亞型,蛋白A瓊脂糖常用于免疫沉淀鼠 IgG2a, IgG2b, IgA, 兔 IgG, 以及人的 IgG1, IgG2和IgG4幾種抗體。
2. 蛋白G
蛋白G是一種源自鏈球菌G族的細(xì)胞壁蛋白,分子量25kDa,為三型Fc受體。蛋白G可以與IgG的Fc 區(qū)域特異性結(jié)合,與Protein A相比對IgG具有更好的結(jié)合能力,血清蛋白結(jié)合水平更低,純度更高,配基脫落也相對更低。重組蛋白G已經(jīng)除去了與白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn),減少了交叉反應(yīng)和非特異性結(jié)合。因此,它比天然蛋白G和蛋白A有更大的親和力。
蛋白G作為親和配基被偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上即蛋白G瓊脂糖(protein G agarose),可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合,Protein G能結(jié)合所有的人和鼠的IGG抗體亞型,包括鼠的IGG1。Protein G也可以與小鼠的IGG2a和IGG2b結(jié)合,而Protein A則不能。
3. 蛋白 L
Protein L是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來的能和免疫球蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),分子量36Kd,與蛋白A和蛋白G結(jié)合到(抗體)的Fc區(qū)不同的是,蛋白L通過輕鏈相互作用結(jié)合的抗體。因?yàn)橹劓湹娜魏尾糠侄疾粫⑴c結(jié)合相互作用,蛋白L結(jié)合更寬范圍的抗體類大于蛋白A或G蛋白L結(jié)合所有抗體類,包括IgG,IgM,IgA的,IgE和IgD的代表。盡管有很寬的結(jié)合范圍內(nèi),蛋白質(zhì)L不是一個(gè)通用的抗體結(jié)合蛋白。 L蛋白結(jié)合僅限于那些含有κ輕鏈的抗體,在人類和小鼠抗體,抗體分子除了包含κ輕鏈,其余有ι輕鏈。例如,它結(jié)合人VκI,VκIII和VκIV亞型但不結(jié)合VκII亞型。
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Protein A | Protein G | Protein L | Protein A/G | Protein A/G/L |
Human |
IgG |
+++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
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IgG1 |
++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ |
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IgG2 |
++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ |
|
Ig3 |
|
+++ | +++ | +++ | +++ |
|
IgG4 |
++++ | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ |
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IgA |
+ |
|
+++ | + | ++++ |
|
IgA1 |
+ |
|
+++ | + | ++++ |
|
IgA2 |
+ |
|
+++ | + | ++++ |
|
IgD |
|
|
+++ |
|
++++ |
|
IgE |
++ |
|
+++ | ++ | ++++ |
|
IgM |
+ |
|
+++ | + | ++++ |
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Fab |
+ | + | +++ | + | ++++ |
|
ScFv |
+ |
|
+++ | + | ++++ |
Mouse |
IgG |
++ | ++ | +++ | +++ | ++++ |
|
IgG1 |
+ | ++++ | +++ | +++ | ++++ |
|
IgG2a |
++++ | ++++ | +++ | ++++ | ++++ |
|
IgG2b |
+++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
|
IgG3 |
++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
|
IgM |
|
|
+++ |
|
+++ |
Rat |
IgG |
+ | ++ | +++ | ++ | +++ |
|
IgG1 |
|
+ | +++ | ++ | +++ |
|
IgG2a |
|
++++ | +++ | +++ | ++++ |
|
IgG2b |
|
++ | +++ | + | +++ |
|
IgG2c |
++ | ++ | +++ | +++ | +++ |
|
IgG3 |
+ | ++ | ? | ++ | ++ |
Horse |
IgG |
++ | ++++ | ? | ++++ | ++++ |
|
IgG(ab) |
+ |
|
? | + | + |
|
IgG(c) |
+ |
|
? | + | + |
|
IgG(T) |
|
+++ | ? | +++ | +++ |
Goat |
IgG |
++ | +++ |
|
++++ | ++++ |
|
IgG1 |
+ | +++ |
|
+++ | +++ |
|
IgG2 |
+++ | +++ |
|
+++ | +++ |
Guinea-pig |
IgG |
+++ | + | ? | +++ | +++ |
|
IgG1 |
++ | + | ? | ++ | ++ |
|
IgG2 |
++ | + | ? | ++ | ++ |
Sheep |
IgG |
+ | ++ |
|
+++ | +++ |
|
IgG1 |
+ | ++ |
|
+++ | +++ |
|
IgG2 |
+++ | +++ |
|
+++ | +++ |
Cow |
IgG |
+ | +++ |
|
+++ | +++ |
|
IgG1 |
+ | +++ |
|
+++ | +++ |
|
IgG1 |
++ | +++ |
|
+++ | +++ |
Rabbit |
IgG |
+++ | +++ | + | +++ | +++ |
Cat |
IgG |
+++ | + | ? | + | +++ |
Dog |
IgG |
++ | + | ? | +++ | +++ |
Pig |
IgG |
+++ | ++ | +++ | +++ | +++ |
Chicken |
IgY |
|
|
|
|
|
Monkey |
IgG |
++++ | ++++ | ? | ++++ | ++++ |
Hamster |
IgG |
+ | ++ | +++ | ++ | ++ |
Koala |
IgG |
|
+ | ? | + | + |
Llama |
IgG |
|
+ | ? | + | + |
Donkey |
IgG |
++ | +++ | ? | +++ | +++ |
注:數(shù)據(jù)條長度表示Protein系列蛋白和抗體的相對結(jié)合強(qiáng)度;Protein L僅和具有Kappa輕鏈的上述抗體結(jié)合;?代表無數(shù)據(jù)支持,不明結(jié)合能力。
蛋白A磁珠選購 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/7094213318.html
蛋白G磁珠選購 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/6485713445.html
蛋白A/G磁珠選購 http://www.tools.7z1ocr.cn/Product/5296483622.html
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